Статья: МОДИФИЦИРОВАННЫЙ ЦТАБ-МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННОЙ ДНК ИЗ ЛИПЫ МЕЛКОЛИСТНОЙ (TILIA CORDATA MILL.) ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ МУЛЬТИЛОКУСНОГО ПОЛИМОРФИЗМА

Липа мелколистная ( Tilia cordata Mill.) является главным медоносным древесным растением в Республике Башкортостан. Липовые леса, составляя основу всего лесного фонда Республики Башкортостан, произрастают в широком диапазоне климатогеографических условий. Это предполагает наличие большого числа популяций липы в Республике Башкортостан, которые к тому же могут различаться по продуктивности и качеству нектара. Поэтому исследования по выявлению генетического полиморфизма и популяционной структуры T. cordata в Республике Башкортостан с использованием различных методов молекулярной генетики представляются актуальными. Для выделения ДНК различных растений наиболее подходящим является использование высушенных листьев, однако у липы они содержат большое количество ингибиторов ПЦР. Исходя из этого, целью нашего исследования был подбор и испытание оптимального метода выделения высококачественной тотальной ДНК из сухих листьев липы мелколистной, пригодной для мультиплексных ПЦР. Качество выделенной ДНК оценивали спектрофотометрически, агарозным гель-электрофорезом и путем постановки реакций ISSR-ПЦР. Из шести испытанных методов выделения ДНК наиболее подходящим для T. cordata оказался модифицированный нами метод с использованием ЦТАБ, который отличается от стандартных подходов использованием в экстрагирующем буфере меркаптоэтанола, поливинилпирролидона и аскорбиновой кислоты, а также растиранием листьев на льду и неполным отбором водной фазы при обработке хлороформом. С использованием данного метода была выделена ДНК из 24 образцов T. cordata из разных районов РБ, проведен ISSR-анализ с использованием восьми праймеров. По результатам анализа были выделены две большие группы популяций липы мелколистной, северная группа была связана с бассейном реки Уфа, а южная - с бассейном реки Белая.